一、流程圖：疫苗免疫→采血→親和層析柱提取→脫鹽→檢測(cè)→分裝→成品

二、操作程序：

（一）血清生產(chǎn)及過(guò)程檢測(cè)：

1、疫苗

2、注射兔子第一次

3、注射兔子第二次（第14天）

4、注射兔子第三次（第28天）注射

5、第35天每兔采1滴血做ELISA

6、第42天滴度<1：3200每兔采1滴血做ELISA，注射第四次。滴度≥1：3200的 第42天采多量血，注射第四次。

7、第49天滴度<1：3200的每兔采1滴血做ELISA。

8、第56天滴度<1：3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第五次滴度≥1：3200的 第56天采多量血。

9、第63天滴度<1：3200的每兔采1滴血做ELISA。

10、第70天滴度<1：3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第六次滴度≥1：3200 的第70天采多量血，注射第五次。

11、第77天滴度<1：3200的每兔采1滴血做ELISA。

12、第84天滴度<1：3200的每兔采1滴血做ELISA。注射第七次滴度≥1：3200 第84天采多量血，以后每15天采血一次。

13、第91天滴度<1：3200的每兔采1滴血做ELISA。做ELISA后，結(jié)果仍<1：3200，則決定處置兔子。

14、滴度≥1：3200的 第98天采血，注射第六次，以后每15天采血一次。每30天注射一次。

（二）抗體提純及檢測(cè)

1、過(guò)柱：收集血清至約100ml時(shí)過(guò)柱，根據(jù)血清的ELISA滴度、第一次和第二次過(guò)柱所得沉淀量的差異，決定過(guò)柱血清量?？贵w收集：1）滴度高的、重要的抗體用丙酮來(lái)沉淀所收集的抗體液，其他抗體用硫酸銨沉淀。2）抗體量多的，加入磷酸三鈉中和后，用蒸餾水透析1小時(shí)，再用0.1M的磷酸三鈉透析2小時(shí)（透析方法見(jiàn)透析膜操作步驟LGBZ-008），然后想臘腸那樣風(fēng)干，待體積極小了，倒入試管中，上凍干機(jī)凍干（動(dòng)感方法見(jiàn)凍干機(jī)說(shuō)明書。）。

2、抗體量小的，先用硫酸銨沉淀，收集夠足夠量后，用一蒸水逐漸溶解至透明，用G25脫鹽柱脫鹽。（具體步驟見(jiàn)脫鹽柱脫鹽步驟LGBZ-007）

3、凍干后的抗體，用小勺刮下抗體粉末、稱重、放入適宜的試管內(nèi)蓋緊，測(cè)好百分含量后標(biāo)記好后，-20度保存；同時(shí)稱少量抗體樣品做檢測(cè)用，稱好的抗體樣品放入1.5ml離心管，按抗體重量加入適量50%甘油+PBS，讓抗體濃度大約在1-5mg/ml之間。

4、檢測(cè)抗體樣品：

1）蛋白濃度（具體步驟見(jiàn)BCA法蛋白定量操作步驟）

2）抗體滴度（具體步驟見(jiàn)ELISA檢測(cè)步驟LGBZ-010）

3）WB（具體步驟見(jiàn)免疫印跡實(shí)驗(yàn)步驟）

5、標(biāo)記

檢測(cè)蛋白濃度后，以檢測(cè)蛋白濃度日期為抗體批號(hào)，在標(biāo)簽紙上寫上抗體名稱、蛋白濃度、滴度、WB稀釋度，貼在管壁，再用封口膠將標(biāo)簽文字覆蓋防水。放-20度保存。