免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blot)，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。Western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡(Western blot)具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術。免疫印跡(Western blot)常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。

藍光生物為您提供全套免疫印跡(Western blot)技術服務和相關的試劑耗材。主要實驗步驟如下：

1. 蛋白質(zhì)抽提

(1). 組織樣品：取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）。

(2). 細胞樣品：每份樣品取1×10⁶～1×10⁷細胞，PBS清洗細胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）。

2. 蛋白質(zhì)定量：按BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。

3. 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預染蛋白marker分別上樣，標準加進第一個孔中，電泳分離蛋白。
4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF/NC膜：按六一蛋白轉(zhuǎn)移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，設定恒流轉(zhuǎn)膜。

5. Western blot膜的封閉和抗體孵育

(1) 膜在5％脫脂奶粉溶液或3% BSA溶液中室溫孵育2小時以封閉膜上的非特異結(jié)合。

(2) 封閉過的膜漂洗后，加入一抗室溫孵育2小時，使抗體與目的蛋白結(jié)合。

(3) 漂洗后，加入配對HRP標記的二抗結(jié)合一抗，室溫孵育膜1小時。

6. Western blot結(jié)果檢測：化學發(fā)光法檢測，膜與化學發(fā)光底物孵育，經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用BANDSCAN分析軟件將圖片上每個特異條帶灰度值的數(shù)字化。

7. 提供實驗報告：包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結(jié)果的相關數(shù)據(jù)。

8. 服務費用：服務內(nèi)容包含蛋白抽提、蛋白濃度測試以及免疫印跡測試【每張膜上做一種目的蛋白。每張膜上可以做8個樣品（不足8個按8個計算），測試目的蛋白和內(nèi)參抗體?！浚渌噭┖牟牡话贵w費用，每張膜的費用是：1000.00元。時間：1-2周。